杨学飞 , 刘亚娟 , 高原 , 孙贝贝 , 马利纳 , 于兴海 , 哈达*

内蒙古大学生命科学学院, 呼和浩特, 010021
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 51 篇   
收稿日期: 2016年06月03日    接受日期: 2016年06月16日    发表日期: 2016年07月28日

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CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)/Cas9 (CRISPR associated proteins)是源于原核生物的一种获得性免疫系统，广泛应用于细菌、真菌、动物和植物的基因编辑研究中。本研究是以GFP(Green Fluorescent Protein)转基因本氏烟草16C(16C transgenic Nicotiana benthamiana, 16C-NB)为材料，利用CRISPR/Cas9技术实现对其GFP基因的编辑工作，使用PCR-RE(polymerase chain reaction-Restriction enzyme)的方法检测了突变体，建立了本氏烟草CRISPR/Cas9基因敲除瞬时表达系统，进而探讨了CRISPR/Cas9系统在植物基因敲除中的应用。在本研究中，采用In-Fusion克隆技术获得了操作性强的中间载体，针对靶基因GFP设计特定靶位点并进行了基因突变实验。为将来开展其它植物内源基因的生物学功能研究奠定了基础。

CRISPR/Cas9；基因编辑；本氏烟草；GFP